DNA COMPLEMENTAR
O DNA complementar (cDNA) é uma molécula de DNA obtida por complementaridade de bases apartir do mRNA que já sofreu processamento (sem intrões).
O processo de obtenção de cDNA é o seguinte:
- Isola-se uma molécula mRNA funcional das células.
- Adiciona-se transcriptase reversa e nucleótidos livres. A transcriptase reversa catalisa a síntese de uma cadeia simples de DNA a partir de um molde de mRNA.
- Junta-se uma enzima que degrada o mRNA que serviu de molde e DNA polimerase que catalisa a formação da cadeia complementar do DNA.
O cDNA pode ser inserido num vector (utilizando enzimas de restrição) contendo o promotor e sequências reguladoras e posteriormente inserido em bactérias. A utilização desta técnica facilita a produção de proteínas de seres eucariontes em bactérias uma vez que estas não possuem mecanismos de processamento de mRNA, isto é, em presença de um DNA original transcreveriam todo o gene, incluindo os intrões, obtendo-se proteínas diferentes das pretendidas.
O DNA complementar (cDNA) é uma molécula de DNA obtida por complementaridade de bases apartir do mRNA que já sofreu processamento (sem intrões).
O processo de obtenção de cDNA é o seguinte:
- Isola-se uma molécula mRNA funcional das células.
- Adiciona-se transcriptase reversa e nucleótidos livres. A transcriptase reversa catalisa a síntese de uma cadeia simples de DNA a partir de um molde de mRNA.
- Junta-se uma enzima que degrada o mRNA que serviu de molde e DNA polimerase que catalisa a formação da cadeia complementar do DNA.
O cDNA pode ser inserido num vector (utilizando enzimas de restrição) contendo o promotor e sequências reguladoras e posteriormente inserido em bactérias. A utilização desta técnica facilita a produção de proteínas de seres eucariontes em bactérias uma vez que estas não possuem mecanismos de processamento de mRNA, isto é, em presença de um DNA original transcreveriam todo o gene, incluindo os intrões, obtendo-se proteínas diferentes das pretendidas.
Curiosidade: Todos os cDNA que se sintetizam a partir do RNA podem ser clonados em bactérias, originando uma biblioteca de cDNA, em que toda a informação (genes que se encontravam a ser transcritos – expressos – num dado momento), fica armazenada em bactérias por longos períodos de tempo, desde que sejam fornecidas todas as condições indispensáveis para a sua manutenção.
Fontes: http://biohelp.blogs.sapo.pt/2575.html%20;%20http://www.cientic.com/tema_engenetica.htmlhttp://www.cientic.com/tema_engenetica.html