DNA RECOMBINANTE
Segmentos de DNA de organismos diferentes são cortados pela mesma enzima de restrição e unidos pela enzima DNA ligase, produzindo dessa forma uma molécula híbrida, que é o DNA recombinante. Este DNA designa o resultado obtido a partir de pedaços de DNA de fontes diferentes ligados entre si. As vezes, o DNA provém de dois organismo diferentes, como é o caso do gene para insulina ligado ao DNA e da bactéria. Outras vezes, um pedaço de DNA de um organismo pode ser ligado a um DNA sintético produzido em laboratório pela junção de nucleotídeos na sequência desejada.
Para se conseguir DNA recombinante, é preciso cortar as moléculas de DNA que se quer recombinar e em seguida, "colar" suas extremidades. Para isso, os investigadores contam o DNA com ferramentas extremamente úteis chamadas enzimas de restrição. Estas enzimas são capazes de cortar uma molécula de DNA em locais bem específicos, ou seja, cada tipo de enzima de restrição reconhece apenas uma certa sequência de nucleotídeos e efectua o corte somente ao encontrar essa sequência na molécula de DNA.Cada bactéria tem as suas próprias enzimas de restrição e cada enzima reconhece apenas um tipo de sequência, independentemente da fonte do DNA.O esquema a seguir, explica melhor o fenómeno e demonstra a técnica de se enxertar um pedaço de DNA estranho (gene) num plasmídeo bacteriano. O gene a ser enxertado pode ser obtido de um animal, de uma planta ou ser preparado em laboratório. Note-se que tanto o plasmídeo como o pedaço de DNA a ser enxertado têm que ser submetidos à mesma enzima de restrição, que os cortará em regiões com a mesma sequência, de forma a aparecerem extremidades coesivas.
Segmentos de DNA de organismos diferentes são cortados pela mesma enzima de restrição e unidos pela enzima DNA ligase, produzindo dessa forma uma molécula híbrida, que é o DNA recombinante. Este DNA designa o resultado obtido a partir de pedaços de DNA de fontes diferentes ligados entre si. As vezes, o DNA provém de dois organismo diferentes, como é o caso do gene para insulina ligado ao DNA e da bactéria. Outras vezes, um pedaço de DNA de um organismo pode ser ligado a um DNA sintético produzido em laboratório pela junção de nucleotídeos na sequência desejada.
Para se conseguir DNA recombinante, é preciso cortar as moléculas de DNA que se quer recombinar e em seguida, "colar" suas extremidades. Para isso, os investigadores contam o DNA com ferramentas extremamente úteis chamadas enzimas de restrição. Estas enzimas são capazes de cortar uma molécula de DNA em locais bem específicos, ou seja, cada tipo de enzima de restrição reconhece apenas uma certa sequência de nucleotídeos e efectua o corte somente ao encontrar essa sequência na molécula de DNA.Cada bactéria tem as suas próprias enzimas de restrição e cada enzima reconhece apenas um tipo de sequência, independentemente da fonte do DNA.O esquema a seguir, explica melhor o fenómeno e demonstra a técnica de se enxertar um pedaço de DNA estranho (gene) num plasmídeo bacteriano. O gene a ser enxertado pode ser obtido de um animal, de uma planta ou ser preparado em laboratório. Note-se que tanto o plasmídeo como o pedaço de DNA a ser enxertado têm que ser submetidos à mesma enzima de restrição, que os cortará em regiões com a mesma sequência, de forma a aparecerem extremidades coesivas.
TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE
· “Abertura” da molécula de DNA do plasmídeo, num ponto específico, pela enzima de restrição;
· Isolamento de genes de interesse noutras moléculas de DNA “dadoras” recorrendo a enzimas de restrição do mesmo tipo;
· Junção do gene a inserir, do plasmídeo e de ligases do DNA;
· Ligação do gene ao plasmídeo formando-se o DNA recombinante;
· Introdução do plasmídeo recombinante em bactérias, que funcionam como células hospedeiras do novo gene;
· Produção da proteína desejada a partir do DNA recombinante.
· “Abertura” da molécula de DNA do plasmídeo, num ponto específico, pela enzima de restrição;
· Isolamento de genes de interesse noutras moléculas de DNA “dadoras” recorrendo a enzimas de restrição do mesmo tipo;
· Junção do gene a inserir, do plasmídeo e de ligases do DNA;
· Ligação do gene ao plasmídeo formando-se o DNA recombinante;
· Introdução do plasmídeo recombinante em bactérias, que funcionam como células hospedeiras do novo gene;
· Produção da proteína desejada a partir do DNA recombinante.
Fontes: http://www.libertaria.pro.br/tdna_recombinante_intro.htm ; http://www.cientic.com/tema_engenetica.html
VIDEOS SOBRE DNA RECOMBINANTE